ZEBRADÁNIÓ (DANIO RERIO) SPERMAMÉLYHŰTÉSÉNEK KIDOLGOZÁSA

Kollár Tímea, Bernáth Gergely, Csenki Zsolt, Kovács Róbert, Kása Eszter, Horváth Ákos

Szent István Egyetem, Mezőgazdaság- és Környezettudományi Kar, Környezet- és Tájgazdálkodási Intézet, Halgazdálkodási Tanszék, Gödöllő

Kivonat

Munkánk során a napjainkban igen elterjedt laboratóriumi modellállat, a zebradánió (Danio rerio) spermájának mélyhűtésével foglalkoztunk. Korábban többen próbálkoztak e faj spermájának mélyhűtésével, viszont ezek a módszerek nem egységesek, továbbá ‑ a kis testméret és a minimális mennyiségű ivartermék miatt ‑ a spermát az egyedek heréinek sebészi úton történő eltávolításával nyerték. E fajnak több mint 4500 mutáns vonala van, ezek között pedig több olyan is létezik, melynek egyedszáma minimális; ezen vonalak megőrzése kiemelkedő jelentőséggel bír. Ebből kifolyólag munkánk során egy olyan spermamélyhűtési eljárás kidolgozását tűztük ki célul, mely az állatok elpusztítása nélkül, az ivartermék lefejésével megvalósítható.

Kísérleteink során a fellelhető szakirodalmi adatok módszerek alapján dolgoztuk.

A különböző egyedektől – üvegkapilláris segítségével – lefejt spermát egy Eppendorf-csőbe, poolozva gyűjtöttük össze. A mélyhűtés során négy hígítót (Hanks-féle sóoldat, pontyféle immobilizáló oldat, módosított Kurokura-oldat, pér hígító), 2,5 és 56oC/perc közötti hűtési sebességeket, valamint különböző hígítási arányokat (1:4, 1:9, 1:19, 1:99) teszteltük. Védőanyagként minden esetben 8% metanolt alkalmaztunk.

A legmagasabb felolvasztás utáni motilitást (24%) pér hígító, 7,5oC/perc hűtési sebesség, és a sperma 1:9 arányú hígításával értük el. Hanks-féle sóoldat és pér hígító keverékének használatával is sikerült igen jó motilitási eredményeket elérnünk (12%), viszont önmagában a Hanks-féle sóoldat alkalmazása ennél alacsonyabb motilitást (7%) eredményezett. A módosított Kurokura-oldat esetében 3%-os, viszont a pontyféle immobilizáló oldat esetében nem tapasztaltunk motilitást. A 7,5oC/perces hűtési sebességen kívül 10oC/percnél (5%) és 15oC/percnél (3%) tapasztaltunk motilitást; a 2,5oC/perc, 5oC/perc, 20oC/perc, és 56oC/perces hűtési sebességek mellett nem találtunk mozgó sejteket. Ezen kívül kétlépcsős hűtési görbéket is teszteltünk, szintén eredménytelenül. A sperma 1:4 arányú (3%), 1:19 arányú (9%), valamint 1:99 arányú (0%) hígításával lényegesen gyengébb motilitást értünk el az 1:9-es hígításhoz képest.

 

A munka a KMR-12-1-2012-0436 és KMR-12-1-2012-0221 pályázat támogatásával valósult meg.

 

Programajánló

Jelenleg nincs aktuális esemény.