KÉT MÓDSZER A ZEARALENON ÖSZTROGÉN HATÁSÁNAK VIZSGÁLATÁRA ZEBRADÁNIÓN (DANIO RERIO)

Bakos Katalin1,2, Csenki Zsolt1, Kovács Róbert1, Kánainé Sipos Dóra1,2, Urbányi Béla1, Kovács Balázs1,2

1Szent István Egyetem, MKK, KTI, Halgazdálkodási Tanszék, Gödöllő
2Szent István Egyetem Környezetipari Regionális Egyetemi Tudásközpont, Gödöllő

Kivonat

A zearalenon egy Fusarium gomba fajok által termelt ösztrogén hatású mikotoxin. A takarmányok révén közvetlenül az élő szervezetbe vagy a gabonafélék feldolgozása során a melléktermékekbe, szennyvízbe kerül. Veszélyt jelenthet az érintkező szárazföldi és vízi ökoszisztémákra, a természetes ösztrogének analógjaként működve megzavarhat kulcsfontosságú élettani folyamatokat (ivarérés, fejlődés, szaporodás) is.

Az ösztrogén hatás kimutatása során használt egyik legismertebb biomarker a vitellogenin, amelynek termelődése szigorúan ösztrogénfüggő. A képződő terméket leggyakrabban ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) módszerrel vizsgálják, ami azonban meglehetősen költséges.

Kísérleteink célja a zearalenon vitellogenin termelődésre gyakorolt hatásának vizsgálata - zebradánió tejeseken (Danio rerio), valamint egy új, olcsóbb, a vitellogenin termelődését kimutató real-time PCR módszer kidolgozása volt.

A halakat 21 napig kezeltük 1 mg/l, 10 mg/l és 0,1 mg/l zearalenonnal félstatikus rendszerben. Pozitív kontrollként 100 ng/l 17-b-ösztradiolt használtuk. A kezelt egyedekből teljes test homogenizátumot készítettünk, amelyből a vitellogenint fehérje szinten mutattuk ki zebradánióra kifejlesztett vitellogenin ELISA kit segítségével. Az mRNS szintű vizsgálatokhoz egy új, duplex real-time PCR módszert dolgoztunk ki, amellyel a homogenizátumban található vitellogenin RNS mennyiségét vizsgáltuk.

Megállapítottuk, hogy az újonnan kidolgozott módszer alkalmas az ösztrogén hatás (vitellogenin géntermék) érzékeny kimutatására és eredménye jól korrelál az általánosan használt ELISA eredményeivel. A zearalenon a legkisebb alkalmazott koncentrációban is indukálta a vitellogenin kifejeződését. A hatás koncentrációfüggő, de az összefüggés nem lineáris. A kidolgozott real-time PCR módszer lehetőséget nyújthat környezeti minták ösztrogén hatásának kimutatására is.

 

A munka Baross Gábor kutatási program (HALEDC09- REG-KM-09-2-2009-0066) és TÁMOP-4.2.2.B-10/1-2010-0011 pályázatok támogatásával készül.

Programajánló

Jelenleg nincs aktuális esemény.