MULTIKOLOR ZEBRADÁNIÓ ALAPÚ TESZTRENDSZER TOXIKOLÓGIAI VIZSGÁLATOKHOZ

Bakos Katalin1, Csenki Zsolt1, Kovács Róbert1, Kánainé Sipos Dóra1, Müller Ferenc2, Yavor Hadzhiev2, Kovács Balázs1 és Urbányi Béla1

1Szent István Egyetem, Mezőgazdaság- és Környezettudományi Kar, Környezet- és Tájgazdálkodási Intézet, Halgazdálkodási Tanszék, Gödöllő
2Institute of Biomedical Research, Department of Medical and Molecular Genetics, School of Clinical and Experimental Medicine, College of Medical and Dental Sciences, University of Birmingham, Birmingham (Nagy-Britannia)

Kivonat

A toxikológia és a farmakológia területén egyre nagyobb igény mutatkozik a környezetbe jutattott szennyezőanyagok kisebb dózisban történő kimutatására alkalmas, az emlősállat-kísérleteket kiváltó tesztrendszerek iránt.

A zebradánió (Danio rerio) széleskörűen vizsgált modellállat, genetikai és fejlődésbiológiai szempontból a legjobban ismert halfaj. A zebradánió embriók átlátszóak, ezért a fluorescens fehérjékkel létrehozott transzgenikus vonalak jól használhatók a toxikus anyagok fejlődésre gyakorolt hatásainak vizsgálatára. Ha a toxikológiai és farmakológiai szempontból fontos szövetekben és szervekben (máj, ér, idegszövet) más-más színű fluorescens fehérjét termel, lehetőség nyílik a szennyezőanyagok ezen szervekre kifejtett hatásainak in vivo nyomon követésére egyetlen vonal segítségével. Ezért célunk olyan, a fenti igényeket kielégítő többszínű transzgenikus vonal létrehozása, amely gyors, tömeges vizsgálatokat tesz lehetővé.

A vonal létrehozása során már rendelkezésünkre álló, ér- és idegszövetben specifikusan zöld (GFP) és vörös (DsRed) fluoreszcens fehérjéket termelő transzgenikus vonalakból indultunk ki és megkezdtük egy új, májspecifikusan fluoreszcens fehérjét kifejező transzgenikus vonal létrehozását.

Az új vonal létrehozásához Tol2 transzpozon alapú, Gateway klónozó rendszerrel hoztunk létre génkonstrukciókat. A májban specifikusan kifejeződő gének közül a vitellogenin-1 gént választottuk, mivel annak promóter régiója ösztrogén hatású anyagokkal indukálható, ezért így a szennyezőanyagok hatásainak vizsgálatán kívül ösztrogén hatású anyagok kimutatására is alkalmas transzgenikus vonal fejleszthető ki. A konstrukcióba a vitellogenin promóter mellett vörös, vagy kék fluoreszcens fehérje (mCherry, BFP) génjét építettünk be.

A vonalak keresztezésével a későbbiek során olyan többszörösen transzgenikus zebradánió vonalak hozhatók létre, amelyek lehetővé teszik a szennyezőanyagok idegszövet fejlődésre, vérsejt képzésre és májra gyakorolt káros hatásainak in vivo detektálását és követését egyazon tesztrendszerben.

 

A munka OTKA (NNF 78834) és Bolyai pályázatok támogatásával készül.

 

Programajánló

Jelenleg nincs aktuális esemény.